达·芬奇的绘画把人文主义思想内容和现实主义的表现手法完美地结合起来，使绘画艺术达到了前所未有的高度。他精确地运用解剖学、透视法和明暗转移法，加之笔画细腻、造型准确、色彩调和、布局匀称，能生动地表现出人物的复杂性格和内心世界。他最有名的作品是《最后的晚餐》和《蒙娜丽莎》。《最后的晚餐》是1495—1498年为米兰圣玛丽亚修道院创作的一幅壁画。它取材于《圣经》故事中关于犹大出卖耶稣的传说，着重刻画耶稣在最后的晚餐上对众门徒宣布“你们当中有一人要出卖我”时，各个门徒不同的姿态、动作和表情。画家依据各人不同的年龄、身份、性格特征和内心活动，把每个人都刻画得惟妙惟肖。在这里，耶稣和圣徒都成了普普通通的人，他们的思想感情与常人无异，充分体现了作者的人文主义思想。这幅画构图新颖，画面和谐均衡，空间和远近法的处理十分恰当，无论是思想性还是艺术手法都达到空前的高度。《蒙娜丽莎》是达·芬奇在1503—1506年为佛罗伦萨银行家妻子创作的肖像画。它是文艺复兴时期最杰出的肖像画之一，标志着达·芬奇艺术的最高成就。画家描绘了新时代的青春女性形象，敏捷地抓住了人物的瞬间表情来揭示人物的内心活动。他把蒙娜丽莎的微笑刻画得极其含蓄、自然、生动、纯朴而又甜美，令人百看不厌，回味无穷。这幅画充分体现了达·芬奇赞美人生、歌颂人的美、把人体作为自然中最美的对象来讴歌的人文主义思想，同时在透视法、明暗转移法等方面也有更大发展。